Определение группы крови цоликлонами

Содержание
  1. Что это такое?
  2. Какие существуют препараты цоликлонов?
  3. Методика исследования
  4. Расшифровка
  5. Подготовка к процедуре
  6. Где можно провести анализ?
  7. Определение резус-фактора
  8. Реакция со стандартными эритроцитами
  9. Методика проведения реакции со стандартными эритроцитами
  10. Оценка результатов проведения реакции со стандартными эритроцитами
  11. Международные шкалы
  12. Проведение
  13. Процедура определения группы крови
  14. Как определить группу в случае неверной трактовки результатов анализа
  15. Достоверность
  16. Факторы, влияющие на отсутствие соединения антител с эритроцитами
  17. Как выглядят цоликлоны?
  18. Правила
  19. Плюсы и минусы методики
  20. Для чего нужно исследование?
  21. Методика определение группы крови стандартными сыворотками
  22. Оценка результатов определение группы крови стандартными сыворотками
  23. Методика определения группы крови перекрестным способом
  24. Как проводится исследование

Что это такое?

Цоликлон – моноклональное антитело, образующееся путем генной инженерии. Чаще всего, для его получения используют мышей – животному вводят специальный антиген, а после получают асцитную жидкость грызуна, в которой и содержатся указанные антитела.

Морфологически, они относятся к иммуноглобулинам класса М, т.е. антителам острой фазы. Механизм действия их обусловлен образованием комплекса антиген-антитело, где в качестве антигена выступают некоторые молекулы (в данной ситуации – белки, определяющие группу крови и ее резус), расположенные на мембране клетки.

Какие существуют препараты цоликлонов?

В настоящее время, в лабораторной диагностике используется 3 типа стандартных цоликлонов – анти-А, анти-В и анти-АВ. Каждый из них вступает в реакцию со специфичным для него антигеном, обуславливая развитие иммунной реакции.

Эти препараты выпускаются в виде ампул или флаконов, содержащих 5 или 10 мл раствора антител. Все они имеют специфическую окраску, по которой и проводится определение каждого типа:

  • анти-А окрашен в красный цвет;
  • анти-В выпускается в виде раствора синего цвета;
  • комбинированный цоликлон анти-АВ (или анти-D) специфической окраски не имеет.

Цоликлон анти-АВ может быть модифицированным и использоваться для определения резус фактора.

Методика исследования

Алгоритм исследования достаточно прост, специальной подготовки к исследованию от пациента не требуется.

Шаг 1. Разбавление водой

Определение группы может проводиться в нативной крови как с использованием консерванта, так и без него. Для исследования берут капиллярную кровь из пальца пациента.

Обязательно соблюдать условия окружающей среды для получения достоверной информации: анализ проводится в хорошо освещенном помещении с умеренной влажностью и температурой не ниже 20 градусов.

Кроме того, следует удостовериться, что кровь была взята у пациента правильно, а срок годности используемых реагентов еще не истек.

Шаг 2. Добавляется кровь

На специальную пластину (или планшетку), на расстоянии друг от друга с помощью специальной пипетки наносят по 1 крупной капле каждого из антител (для удобства, лучше располагать их так – А, В, АВ). Возле каждой из капель цоликлонов необходимо поместить по одной капле исследуемой крови и при покачивании планшетки постепенно их перемешать.

Визуально, результаты исследования можно определить уже через 5-10 секунд после начала анализа. В исследуемой крови обнаруживаются так называемые “красные конгломераты” – склеившиеся эритроциты. Образуются они в результате реакции агглютинации, т.е. в том случае, когда цоликлон соответствует антигену (в том числе и при исследовании на резус-фактор). Если же агглютинации не наблюдается, то соответственно имеется расхождение между исследуемыми антигенами и имеющимися антителами.

Шаг 3. Происходит реакция слипания эритроцитов

Расшифровка

Для определения группы крови цоликлонами на основе результатов химических реакций можно использовать специально разработанную таблицу.

Группа кровиРеакция с анти-АРеакция с анти-ВРеакция с анти-АВ
I (0)
II (A)++
III (B)++
IV (AB)+++

Подготовка к процедуре

В кабинете должна отсутствовать пыль, мухи, насекомые, которые могут помешать выполнению теста. Помещение должно быть хорошо освещено. Флакон с цоликлонами должен быть плотно закрыт, чтобы реагенты не пересохли, в противном случае достоверность анализа снизится. Для определения группы крови и резуса при помощи цоликлонов нужна специальная подготовка. В лабораторном кабинете температура воздуха может быть +15…+25ºC, в этом случае результат будет точным.

Читайте также:  Норма холестерина в крови у женщин после 60 лет: от чего она может зависеть?

Перед анализом подготавливают нужные медицинские инструменты:

  • пробирку;
  • планшет, на который наносят реагент;
  • пипетки;
  • палочки для изъятия лабораторных образцов.

Если медицинский работник не только выполняет исследования, но и берет анализ у пациента, то надо подготовить:

  • жгут;
  • спирт для медицинской обработки;
  • одноразовый шприц;
  • пробирки;
  • ватный тампон;
  • салфетки;
  • специальный лабораторный маркер.

Где можно провести анализ?

Определение группы цоликлонами постепенно приобретает все большую популярность. Если раньше эта процедура проводилась исключительно в специализированных стационарах (к примеру, только в отделениях гематологии и хирургии), то сейчас процедура доступна почти в любой достаточно оборудованной лаборатории.

Методика цоликлонов находит применение и в поликлиниках. Там ее включают различные методы экспресс-определения группы крови, проводимые с целью скорейшего выставления пациенту диагноза.

На платной основе проведение этой услуги предлагают и многие центры косметологии и частной медицины. Бесплатно данная процедура, как было сказано выше, проводится по направлению терапевта или лечащего врача.

проведение анализа
Если отсутствует возможность обратиться за анализом крови в поликлинику, исследование можно провести и самостоятельно при наличии набора препаратов и специальной планшетки.
Однако необходимо помнить, что для получения достоверных результатов требуется соблюдать условия процедуры, в особенности это касается стерильности.

Определение резус-фактора

На поверхность планшетки капают очень большую каплю реагента анти-D, а рядышком очень маленькую капельку крови. Все это смешивают и ждут результата. Когда происходит агглютинация, значит, кровь с положительным резусом, а если ее нет, то резус-фактор — отрицательный.

Реакция со стандартными эритроцитами

Для реакции со стандартными эритроцитами необходимы стандартные эритроциты трёх групп крови: 0 (I), А (II), B (III).

Методика проведения реакции со стандартными эритроцитами

  1. Кровь для исследования берут из вены в пробирку, центрифугируют или оставляют на 30 мин для получения сыворотки.
  2. На маркированную тарелку наносят три больших капли (0,1 мл) сыворотки крови из пробирки, а рядом с ними по одной маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов групп.
  3. Соответствующие капли смешивают стеклянными палочками, планшет покачивают, наблюдают в течение 5 мин, в капли с агглютинацией добавляют NaCl 0,9% и оценивают результат.

Оценка результатов проведения реакции со стандартными эритроцитами

Оценивают результаты, полученные со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и стандартными эритроцитами. Особенность результатов реакции со стандартными эритроцитами — эритроциты группы 0 (I) считают контрольными. Результат перекрёстного способа считают достоверным, если при  реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и со стандартными эритроцитами ответы о группе исследуемой крови совпадают. Если этого не происходит, обе реакции следует переделать.

Международные шкалы

Проведение

Для того, чтобы произвести исследования на группу крови человека, пациенту не нужно выполнять ни каких действий. Медицинскому работнику достаточно взять кровь из пальца.

При исследовании крови очень важно хорошее освещение и условия окружающих факторов. Реагенты должны иметь действующий срок годности, а кровь, взятая, у пациента отвечала всем нормам.

Для того, чтобы определить группу крови цоликлонами используют специальный алгоритм:

Необходима таблица с заранее высушенными реагентами, которым присвоено свое место, по несколько капель добавляют воды, после чего по капле крови добавляют на каждый цоликлон, и перемешиваются аккуратно специальным инструментом. После проведенной процедуры, результат анализа крови можно заметить уже через 15 секунд, на таблице проявятся склеившиеся эритроциты. Если же склеивание крови не происходит, значит, существует расхождение между антителами и антигенами, расшифровка анализа крови на определение группы происходит достаточно быстро.

Чтобы полностью установить результат исследований необходимо использовать анализатор:

  • Если реакция не наблюдается ни в одной таблице, значит у пациента первая группа крови.
  • Если реакция наблюдается возле цоликлона А, то значит пациент обладатель 2 группы крови или 4.
  • Если реакция происходит возле цоликлона В, то значит пациент имеет 3 группу крови ил 4 группу.
Читайте также:  Флебодиа 600: от чего помогает, инструкция по применению, аналоги, цена, отзывы

Методика проведения анализа
Таблица показателей реакции цоликлонов

Процедура определения группы крови

Процедура, как определить группу крови с помощью цоликлонов, очень проста и проводится за несколько минут. Для нее потребуется нативная («живая») капиллярная кровь, допускается наличие в ней консерванта. Также понадобится планшет — плоская поверхность из стекла, на которой будет происходить реакция. Процедуру проводят по определенному алгоритму:

  1. нанести две большие капли цоликлонов на поверхность планшета (обычно реагент анти-А находится слева, а анти-В — справа);
  2. добавить небольшие капли крови, которые по объему будут в 10 раз меньше реагентов;
  3. аккуратно двигать планшет, чтобы кровь смешалась с раствором, но две капли не соединились друг с другом;
  4. через несколько минут наблюдать результаты.

Для установления группы подойдет и кровь с добавлением консерванта. Однако простота методики позволяет проводить ее на месте непосредственно после взятия биологического материала. Достаточно набрать небольшое количество капиллярной крови из пальца, чтобы ее полностью хватило для проведения анализа.

Цоликлоны

Как определить группу в случае неверной трактовки результатов анализа

Иногда возможно получение недостоверных, ложных результатов. К примеру, если при добавлении к препарату крови изменился их цвет или если агглютинация наблюдается во всех ячейках планшетки.

Чтобы предотвратить такие результаты, если выполняется определение группы цоликлонами, алгоритм действий предусматривает определенные правила. Сначала следует посмотреть на срок обращения цоликлонов. Недопустимо использовать реагенты, у которых истек срок годности.

планшетка
Обязательно нужно соблюдать и все условия правильного проведения процедуры. Помещение должно иметь хорошо оборудованное рабочее место с температурным режимом и достаточным освещением. Если инструкция к препарату содержит указания и касательно требуемой влажности, следует учитывать и данный фактор.

Немалое значение имеет и чистота планшетки, так как ее загрязнение может привести к возникновению ошибок в исследовании и, как следствие, к получению неверных результатов.

Достоверность

При соблюдении техники и алгоритма определения группы крови цоликлонами процедура обладает практически 100%-й достоверностью – ошибки возможны только при использовании непригодных химических веществ и биоматериала.

В случаях, когда результат является сомнительным, исследование нужно переделать, а образцы рассмотреть более тщательно с использованием увеличения.

Факторы, влияющие на отсутствие соединения антител с эритроцитами

Существуют определенные причины, по которым агглютинация может остаться незамеченной:

  • температура в помещении выше 25 0С, поэтому реакция запоздалая или очень слабо выражена;
  • может быть, неправильное соотношение антител и крови, капля их должна превышать кровяную в восемь раз;
  • в эритроцитах слабая реакция склеивания;
  • антитела неправильно хранятся или срок их действия уже истек.

Как выглядят цоликлоны?

Цоликлоны производятся в виде жидкого вещества, разлитого в пузырьки по 5 или 10 мл. Каждый из них имеет собственные химические и физические параметры: анти-А представляет собой жидкость розовато-желтого или красноватого оттенка, анти-В – синеватый раствор, анти-АВ представляет собой бесцветную субстанцию.

Помимо вышеперечисленных реагентов, в комплект для анализа может также входить цоликлон анти-D, использующийся для определения резус-фактора.

Правила


Чтобы методика определения группы крови с помощью цоликлонов была максимально информативной, важно придерживаться правил работы с веществами и выполнения процедуры:

  • анализ проводится только в условиях полноценной лаборатории в стерильных условиях при температуре от +15 до +25 градусов и при достаточно ярком освещении;
  • в работе следует использовать только вещества с неистекшим сроком годности (он составляет 2 года), которые хранились в плотно закупоренных емкостях;  если раствор помутнел, содержит осадок или другие посторонние примеси, рекомендуется его заменить;
  • для проведения исследования потребуется ровная поверхность (планшетка, специальная тарелочка) белого цвета, несколько пипеток и стеклянных палочек для смешивания образцов.

Кровь для исследования может использоваться любая (из пальца, вены или замороженная) – главное, чтобы она хранилась при соответствующих условиях и была пригодной для проведения процедуры.

Читайте также:  Общий анализ крови при беременности: где норма, а где патология

Плюсы и минусы методики

Основные преимущества способа определения группы крови цоликлонами – высокая достоверность, минимальное количество времени, необходимое для получения результатов, доступность и приемлемая стоимость реагентов. Они не содержат фрагментов человеческих тканей, поэтому абсолютно безопасны для медицинского персонала и не требуют сложного оборудования для выполнения процедуры.

Недостаток заключается в высокой чувствительности веществ к воздействию окружающей среды: даже при малейшем нарушении условий хранения и работы с ними результаты могут получиться неточными.

Для чего нужно исследование?

Техника определения группы крови с помощью цоликлонов была разработана для того, чтобы выявить в образцах крови человека присущий определенной группе набор биохарактеристик и антигенов. Переливание больному несовместимой крови (той, которая имеет другие характеристики) влечет за собой серьезную опасность для жизни – иммунитет человека начинает бороться с чужеродными агентами и уничтожать их, что вызывает необратимые изменения в организме.

По этой причине, в случаях, которые могут сопровождаться обширной кровопотерей, врачи должны точно знать параметры крови больных.

Методика определение группы крови стандартными сыворотками

  1. Подписать тарелку (Ф.И.О. пациента);
  2. Нанести обозначения двух серий стандартных сывороток I, II и III групп крови в объёме 0,1 мл, образующие два ряда по три капли слева направо: 0 (I), А (II), В (III);
  3. Забрать кровь из вены. Шесть капель исследуемой крови пациента перенести стеклянной палочкой на пластину в шесть точек рядом с каплей стандартной сыворотки и перемешать.

Агглютинация начнется через 30 сек. В те капли, где произошла агглютинация, добавить по одной капле NaCl 0,9% и оценить результат.

Оценка результатов определение группы крови стандартными сыворотками

Положительная реакция агглютинации может быть пескообразной или лепестковой. При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет. Результаты реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы (двух серий) должны совпадать. Принадлежность исследуемой крови к соответствующей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сыворотками после наблюдения в течение 5 мин. При этом следует отметить, что если сыворотки всех трёх групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена (А и В) и принадлежит к группе AB (IV). Однако в таких случаях для исключения неспецифической реакции агглютинации необходимо провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой группы AB (IV), не содержащей агглютининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии агглютинации в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп 0 (I), А (II) и В (III), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ (IV).

Методика определения группы крови перекрестным способом

Как проводится исследование

Алгоритм определения группы крови цоликлонами состоит в следующем. Лабораторное тестирование осуществляется при помощи 3 видов этих веществ:

  • «Анти-A» красного цвета, такой же оттенок имеет бутыль, крышка и этикетка препарата.
  • «Анти-B» имеет синий цвет, а также крышку, бутыль и этикетку, окрашенные в синий тон.
  • «Анти-D» — бесцветный и находится в прозрачной бутылке.

При определении резус-фактора цоликлонами нельзя применять некачественные реагенты. Если флакон имеет дефекты или внутри жидкости есть осадок, то реагент потеряет свое действие. Чтобы определить группу, медицинский работник наносит цоликлоны на лабораторную пластину, выполненную в виде таблицы. Наносятся реагенты разных типов (A, B и D). Каждый образец подписывается. Цоликлон наносят на отмеченный участок. Каждый вид реагента берут своей пипеткой.

Рядом с сывороткой капают по 1 капле крови человека, затем чистой палочкой ее размешивают с реагентами. Через несколько секунд начнется реакция. Лаборант проводит наблюдение за реагентами 3 минуты. Потом можно расшифровывать результат анализа.

Источники

  • https://redkrov.ru/group/opredelenie-s-pomoshhyu-coliklonov.html
  • http://1pokrovi.ru/krov/gruppa/opredelenie-coliklonami.html
  • https://MedicalOk.ru/gruppa-krovi/opredelenie-tsoliklonami.html
  • https://moyakrov.info/blood/tsoliklony-opredelenie-gruppy-krovi-rezus-faktor
  • https://kodkrovi.ru/analizy-krovi/analiz-na-opredelenie-vashego-rezusa-i-gruppy/
  • https://anest-rean.ru/gruppa-krovi/opredelenie/
  • https://SostavKrovi.ru/gruppy/algoritm-opredeleniya-gruppy-krovi-coliklonami.html
  • https://serdec.ru/krov/coliklony-opredeleniya-gruppy